دستگاه real-time PCR به جهت بررسی میزان بیان ژن های موجودات زنده توسعه یافته است. محدودیتی که سیستم PCR ساده بوجود آورده است عدم توانایی بررسی کمی میزان بیان یک ژن می باشد. لذا سیستمی تحت عنوان( real-time PCR ریل تایم پی سی آر) ساخته شده و توسعه یافته است. آن چه که مشخص است هدف غایی ژن های موجودات زنده می باشد که کل مجموعه ژنومی تلاش در ساخت محصولاتی از جنس RNA و پروتئین دارد. آن چه که می تواند مشخص کند یک سلول چه ویژگی هایی را در سطح فنوتیپی دارد و در چه سطحی آن ویژگی را بروز می دهد RNA یا ریبونوکلویک اسید های آن سلول می باشد. همچنین جهت مقایسه دو سلول از نظر ویژگی های فنوتیپی نمی توان آن ها را در سطح DNA بررسی نمود، چرا که DNA همیشه ثابت بوده و یک ژن مشخص در بین موجودات یک گونه شباهت بسیاری به هم دارد و هیچ نشانه ای از میزان بیان آن ژن عرضه نمی کند.
لذا بررسی بیان یک ژن می تواند در سطح RNA و یا پروتئین انجام پذیرد. از طرفی بسیاری از ژن ها در نهایت به RNA تبدیل شده و نقششان را تحت عنوان RNA به انجام می رسانند. در نتیجه در برخی موارد محصول ژنی به شکل RNA عرضه شده و هیچ گاه قرار نیست به پروتئین ترجمه شود. در اینصورت برای بیان آن ژن مشخص که فقط رونویسی می شود ولی ترجمه نمی شود، فقط RNA مورد بررسی می باشد. مولکول RNA یا ریبونوکلویک اسید به دلیل داشتن اکسیژن در کربن شماره 2 و همچنین تک رشته و کوتاه بودن آن، نسبت به مولکول های DNA واکنش پذیر تر بوده و تخریب پذیری بالایی دارد. در سیستم( real-time PCR ریل تایم پی سی آر) جهت بررسی بیان یک ژن، ابتدا با کمک آنزیم رونوشت بردار معکوس (Reverse Transcriptase) مولکول های RNA را به DNA های مکمل که عموما cDNA نامیده می شوند، تبدیل می شوند. پس از پایداری مولکول مورد سنجش، وارد سیکل های( real-time PCR ریل تایم پی سی آر) شده و بیان مورد بررسی قرار می گیرد. دستگاه real-time PCR (ریل تایم پی سی آر) از یک سیستم اپتیکی بهره برده که توسط آن میزان DNA هر نمونه محاسبه می گردد. زمانی که cDNA سنتز شد، پس از آماده سازی نمونه جهت ورود به سیکل های پلیمریزه شدن، به نمونه DNA رنگی تحت عنوان سایبر گرین (SYBR Green) اضافه می گردد. سایبر گرین (SYBR Green) موجب رنگ شدن DNA شده و همچنین خود دارای خاصیت فلورسانتی می باشد. زمانی که( real-time PCR ریل تایم پی سی آر) سیکل های پلیمریزاسیون خود را شروع کرد، به ازای ساخته شدن رشته های DNA جدید، رنگ سایبر گرین (SYBR Green) به رشته متصل می شود و دستگاه real-time PCR (ریل تایم پی سی آر) توسط سیستم اپتیکی خود خوانش فلورسانتی را شروع می کند. لذا دستگاه real-time PCR (ریل تایم پی سی آر) با خاصیت فلورسانتی سایبر گرین (SYBR Green) برای هر نمونه یک گراف تکثیر ترسیم می کند. هر نقطه از گراف تکثیر نشان دهنده میزان اتصال سایبر گرین (SYBR Green) به رشته DNA می باشد و در نهایت گراف که در نمایشگر متصل شده به real-time PCR (ریل تایم پی سی آر) به نمایش در آمده، به آستانه خود می رسد. این میزان نشان دهنده میزان DNA بیان شده در هر نمونه می باشد.
لذا با توجه به اینکه مقایساتی که کمی گزارش می شوند نسبت به گزارشات کیفی از ارزش بالاتری برخوردار هستند، تکنیک real-time PCR (ریل تایم پی سی آر) نیز نسبت به تکنیک هایی چون RT-PCR که میزان RNA تولید شده در سلول را به شکل کیفی گزارش می کند، از ارزش بالاتری برخوردار می باشد.
تشخیص بیماری تنفسی کووید ۱۹ و ویروس کرونای جدید همراه آن با استفاده از آزمونهای واکنش زنجیرهای پلیمراز (PCR)، آزمایش اسید نوکلئیک و کیتهای آزمایش الیزا انجام میشود. پژوهش منتشر شده در فوریهٔ ۲۰۲۰ ادعا میکند که سیتی اسکن سینه بهتر از آزمونهای واکنش زنجیرهای پلیمراز بازدهی دارد.
واکنش زنجیرهای پلیمراز (PCR)
یکی از نخستین آزمونهای PCR در ژانویهٔ سال ۲۰۲۰ در بیمارستان شاریته وابسته به دانشگاه هومبولت برلین با استفاده از واکنش زنجیرهای پلیمراز همپا (Real Time – Polymerase Chain Reaction) یا (RT-PCR) صورت گرفت. این آزمون پایهٔ ساخت و توزیع ۲۵۰ هزار کیت آزمایشگاهی است که سازمان جهانی بهداشت در جهان پخش میکند باوجوداین، این روش اندازهگیری آزمایشگاهی بسیار گرانقیمت میباشد.
شرکت کوجن-بیوتک (Kogenebiotech) در کرهٔ جنوبی کیتهایی به نام پاورچک برای تشخیص ویروس کرونا با پایهٔ واکنش زنجیرهای پلیمراز ساخت. این کیتها ژن E موجود در همهٔ ویروسهای کرونای بتا و ژن RNA پلیمراز وابسته به (RNARdRp) که مخصوص کرونای جدید است را جستجو میکنند دیگر شرکتها مانند سیجین (Seegene) و سولجنت (Solgent) در فوریهٔ ۲۰۲۰ کیتهای تشخیص کرونای خودرا با نامهای DiaPlexQ و Allplex 2019-nCoV تولید کردند.